Microbiología

Microbiología

Fecha: 27/08/2018 – 27/12/2018 Autor: Eva Nicola Salas  /Pág. 1-12
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Análisis genético de la resistencia a isoniacida en cepas de Mycobacterium tuberculosis

Resumen

Objetivo: Analizar genéticamente la resistencia a Isoniacida en cepas de Mycobacterium tuberculosis mediante PCR-RFLP de la región S315T del gen katG.

Materiales y métodos: El estudio se realizó a partir de cultivos positivos de Mycobacterium tuberculosis receptados en el Centro de Referencia Nacional de Micobacterias, durante el período 2013 – 2014. El ADN extraído fue cuantificado y evaluada su pureza, por espectrofotometría. Para determinar el polimorfismo en la región 315 del gen katG a partir de un producto de amplificación de 630 pb se realizó digestiones con las enzimas de restricción MspI y SatI.

Resultados: Del total de 498 cepas analizadas, 215 cepas presentaron características fenotípicas de resistencia a isoniacida (32,6 % monorresistencia, 19,5 % MDR y 47,9 % polirresistencia), 283 cepas eran sensibles. 251 cepas correspondieron a pacientes vírgenes al tratamiento (VT); 174 fueron pacientes antes tratados (AT) y 73 fueron pacientes se encontraban con tratamiento (CT). La mayoría de los casos provenía de la provincia del Guayas (77,2 %). La PCR-RFLP-SatI presentó alto porcentaje de sensibilidad (98,6 %) y especificidad (98,2 %), mientras que con la enzima MspI el porcentaje de sensibilidad fue 88,8 % y 7,4 % de especificidad.

Conclusión: La PCR-RFLP-SatI demostró ser específica y económica para la detección de resistencia a isoniacida, proporcionando resultados de forma rápida, la aplicación de esta técnica como apoyo para el diagnóstico permitiría al paciente acceder a un tratamiento más oportuno.

Palabras claves: Mycobacterium tuberculosis, catalasa, isoniacida, digestión enzimática

Genetic analysis of isoniazid resistance in strains of Mycobacterium tuberculosis

Abstract

Objective: Genetically analyze the Isoniazid resistancein Mycobacterium tuberculosisculturesby PCR-RFLP of the S315T region of the katG.

Materials and methods: The study was carried out in positive cultures of Mycobacterium tuberculosis, received at the National Reference Center of Mycobacteria, during the period 2013-2014. The DNAextractedwas quantified and its purity was evaluated by spectrophotometry. To determine the polymorphism in the 315 region of the katG gene, digestions were made with the restriction enzymes MspI and SatI from a 630 bp amplification product.Results: Of 498culture strains analyzed, 215 strains showed phenotypic characteristics of resistance to Isoniazid(32,6% monoresistance, 19,5% MDR and 47,9% polyresistance) and283 strains were sensitive. 251 strains corresponded to virgin patients to treatment (VT); 174 were patients before treated(AT) and 73 were patientstreated (CT). The majority of cases came from the province of Guayas (77,2%). The PCR-RFLP-SatI presented a high percentage of sensitivity (98,6%) and specificity (98,2%), while with the MspI enzyme the sensitivity percentage was 88,8% and 7,4% specificity. Conclusion: The PCR-RFLP-SatI proved to be specific and economical for the detection of resistance to isoniazid, providing results quickly, the application of this technique as a support for the diagnosis would allow the patient to access a more timely treatment Keywords: Mycobacterium tuberculosis, catalase, isoniazid, enzymatic digestion.

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