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Revista Ecuatoriana de Ciencia, Tecnología e
Innovación en Salud Pública
Código ISSN 2588-0551
Revista cientíca INSPILIP - Volumen 7 - Número 22 - Mayo - Agosto 2023
https://www.inspilip.gob.ec
Monteros A., Flores C., Castillo
F. Técnicas moleculares usadas en
el diagnóstico y estudio del virus
de la viruela símica. INSPILIP.
2023; Vol. 7, Núm. 22.
Revista cientíca INSPILIP.
Volumen 7, Número 22, mayo -
agosto de 2023.
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Patricio Vega Luzuriaga
EDITOR EN JEFE
iD
Aly Daniel Monteros-Cedillo
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, * aly_monteros_@hotmail.com
iD
Carlos Enrique Flores-Montesinos
a
, cores@ucacue.edu.ec
iD
Freddy Damián Castillo-Solano
a
, fcastillos@ucacue.edu.ec
a. Universidad Católica de Cuenca, Cuenca, Ecuador.
*Correspondencia: Aly Daniel Monteros Cedillo Email: aly_monteros_@hotmail.com
Identicación de la responsabilidad y contribución de los autores: Los autores declaran
haber contribuido en idea original (DM), parte metodológica revisión sistemática (DM,CF,FC),
redacción del borrador (DM,FC) y redacción del artículo (DM,CF,FC).
Fecha de Ingreso: 3/7/2023.
Fecha de Aprobación: 17/8/2023.
Fecha de Publicación:20/8/2023.
Técnicas moleculares usadas en el diagnóstico y estudio del virus de la viruela símica
Molecular Techniques used in the diagnosis and study of the Monkeypox Virus
Artículo de Revisión
Acceso abierto
Resumen
Citación
La Organización Mundial de la Salud, en julio de 2022, declara a la viruela
del mono como un problema público de salud por brotes epidémicos en países
que no han reportado esta enfermedad previamente. Esta patología infecciosa
es causada por uno de la familia orthopoxvirus, endémico de África central
y occidental, que ha sido considerado relevante por ser el orthopoxvirus
más importante internacionalmente. Actualmente, una detección rápida
de la enfermedad es importante para control epidemiológico, y se realiza
principalmente por técnicas moleculares de detección como: amplicación
mediada por recombinasa (RPA), GeneXpert, PCR en tiempo real y
amplicación isotérmica mediada por bucle (LAMP). El objetivo fue describir
las técnicas moleculares usadas en el diagnóstico y estudio del virus de la
viruela símica. Las pruebas de detección molecular, a pesar de ser distintas
en su metodología, presentaron una alta sensibilidad y especicidad en la
detección de los genes diana. Sin embargo, los estudios realizados en RPA, a
pesar de que fueron rápidas con un tiempo entre 7 – 30 minutos, presentaron
mejores límites de detección en relación a las otras pruebas y detectaron a
los genes: G2R, G2L y la proteína de unión al factor de necrosis tumoral,
sugiriendo una alta conabilidad.
Palabras clave: Virus de viruela símica, Viruela símica, Técnicas de
Laboratorio Clínico, Técnicas de detección molecular.
DOI: 10.31790/inspilip.v7i22.432
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Abstract
In July 2022, the World Health Organization
declared Monkeypox a public health issue due
to epidemic outbreaks in countries that had not
previously reported them. Monkeypox is caused
by a virus of the orthopoxvirus family, endemic
to Central and Western Africa, being considered
as the most signicant strain of orthopoxvirus
internationally. The rapid detection of the disease
is of utmost importance for epidemiological
control. Molecular laboratory techniques used
for detection are: real time PCR, recombinase
polymerase amplication (RPA), GeneXpert and
loop-mediated isothermal amplication (LAMP).
The objective of this study is to describe the
molecular techniques used in the diagnosis and
study of the Monkeypox virus. Molecular screen
testing, despite being dierent from its methodology,
showed high sensibility and specicity in detecting
the targeted gene. However, the studies performed
with RPA, even though they were fast, with time
used oscillating between between 7 and 30 minutes,
and presented the best detection limits compared
with the other tests; also, they detected the genes:
G2R, G2L and the protein that induces the tumor
necrosis factor, which suggests high reliability.
Keywords: Monkeypox virus, Monkeypox, Clinical
laboratory techniques, Molecular Diagnostic
Techniques.
Introducción
La viruela del mono es una patología de carácter
infecciosa ocasionada por orthopoxvirus (1) es
zoonótica y endémica de zonas de selva tropical
en África occidental y central (2). Sin embargo,
la Organización Mundial de la Salud (OMS),
en julio de 2022, declara a esta infección como
un problema de salud pública debido a brotes
epidémicos en países que jamás han reportado esta
enfermedad (3).
Los orthopoxvirus son un género que abarcan:
virus de la viruela bovina, vaccinea (empleado en
la vacuna contra la viruela), y virus de la variola (4).
Sin embargo, a pesar de que en 1980 es declarada
erradicada por el sistema de vacunación, el virus
de la viruela símica es considera el orthopoxvirus
más importante internacionalmente (5).
En el 2022, el Centro para el Control y Prevención
de Enfermedades (CDC) ha reportado 78.379
casos de la viruela símica en todo el mundo, siendo
el 98 % en ubicaciones que no han presentado
históricamente esta patología (6). Además, la
Organización Panamericana de la Salud (OPS)
manifestó que en las Américas mantienen
alrededor de los 40.000 casos (3,6).
Por otra parte, la OPS asegura que puede ser muy
difícil el diagnóstico en función a la clínica del
paciente, debido a la gran cantidad de patologías
que se caracterizan por erupciones cutáneas. Es
por esta razón que se debe ofrecer una prueba de
detección molecular al paciente que se considere
como un caso sospechoso (7,8). No obstante, a
pesar de que se considere al PCR en tiempo real
como el “gold standard” para la detección de la
viruela símica (9), las dicultades técnicas por
costos operativos y tiempo de lectura, ha hecho
que se implementen técnicas novedosas en la
detección molecular (10).
Por lo tanto, la nalidad de esta revisión es describir
las técnicas moleculares usadas en el diagnóstico
y estudio del virus de la viruela símica.
Desarrollo
Denición
En 1958, en monos cynomolgus se identicaron
erupciones pustulares que resultaron ser causadas
por el virus de la viruela símica (11). Estos fueron
enviados desde África a Copenhague, con nes
investigativos; de ahí, el nombre (12). En la década
de los 70’, en la República Democrática del Congo
(RDC) se notica del primer caso en un pediátrico
de 9 meses de edad (13). Dos clados se han
identicado desde entonces: las cepas de África
Occidental y las de África Central. La letalidad
de estas es de 3.6 % y 10.6 % respectivamente
(14). La cepa de África Occidental generalmente
da infecciones más autolimitadas, mientras que la
cepa de África Central se asocia a mayor letalidad
y transmisibilidad (15).
Al ser un virus de DNA, la viruela símica
corresponde a la familia de los Pokviridae
pertenecientes al género Orthopoxvirus (16).
Los Pokviridae se clasican en dos subfamilias:
Choropoxvirinae y Entomopoxvirinae (17). En
la subfamilia de los Choropoxvirinae, hay cuatro
géneros que pueden inducir enfermedades en
humanos, entre estos, los Orthopoxvirus. Este
género contiene varios virus que infectan humanos
como: virus de la viruela bovina, viruela del mono,
virus de la viruela, entre otros (12).
DOI: 10.31790/inspilip.v7i22.432
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Genoma viral
El virus de la viruela símica mide entre 200 –
250 nanómetros y presenta una doble cadena de
DNA del genoma que mide aproximadamente
197.2 kilobases (kb) y es capaz de codicar
181 proteínas. El genoma es lineal y presentan
extremos en horquillas (3’ y 5’). Los 10 kb de
las repeticiones terminales invertidas (ITR) se
localizan en los extremos del genoma. Por otra
parte, los genes de “mantenimiento” se localizan
en el área central y se encargan de los procesos de:
replicación, transcripción y ensamblaje viral. Los
genes codicados en las terminales del genoma
varían y lo diferencia de otros poxviridae. Además,
producen proteínas implicadas en la enfermedad y
propagarse en otros hospederos (18).
La replicación viral se da a nivel citoplasmático
de las células infectadas. La endocitosis viral,
la micropinocitosis y la fusión de membrana
celular, facilitan la entrada del virus a la
rofaringe, nasofaringe, tejido celular subcutáneo,
intradérmico e intramuscular. Además, la
fagocitosis inmunomediada se desencadena por
la replicación viral, haciendo que el virus se
propague por: ganglios linfáticos, amígdalas,
sangre, bazo, entre otros órganos (18).
Figura 1: Estructura y genoma del virus de
la viruela símica. Disponible en: Karagoz A,
Tombuloglu H, Alsaeed M, Tombuloglu G,
AlRubaish AA, Mahmoud A, et al. Monkeypox
(mpox) virus: Classication, origin, transmission,
genome organization, antiviral drugs, and
molecular diagnosis. J Infect Public Health. 2023
Apr 1;16(4):531–41.
Evolución del genoma del virus de la viruela
símica
Los poxviridae mutan alrededor de 10−5 y
10−6 veces por replicación. En el brote del año
2022, en Estados Unidos, se evaluó la secuencia
genómica del virus y se pudo determinar la gran
cantidad de mutaciones en comparaciones con
los anteriores estudios. Estas mutaciones se
dieron principalmente en el gen APOBEC3 (del
inglés, apolipoprotein B mRNA Editing Catalytic
Polypeptide-like 3) en la porción 5’ guanina
adenina – adenina adenina (18).
En Alemania, durante el brote de 2022, Jones et al.
(19) analizaron 47 secuencias genómicas del virus.
Se observó que hubo cambios en aminoácidos no
sinónimos en comparación con cepas anteriores al
brote. Se analizaron cambios en la región 5’ del
gen APOBEC3 que se duplicó en secuencia de dos
lesiones en un mismo paciente. Además, debido
a una translocación en los extremos del genoma,
cuatro genes cerca del extremo 3’ se eliminaron o
interrumpieron. Esta reorganización genómica es
importante para los Orthopoxvirus debido a que
le da ventajas evolutivas y les permite adaptarse
en esta, sin precedentes, transmisión de persona a
persona en el actual brote (19).
En las zonas terminales del genoma, es más visible
la plasticidad genómica de los Orthopoxvirus por
sus dos repeticiones terminales invertidas (ITR). La
modicación de estas áreas facilita la adaptación
del virus al cambio de huéspedes. Además, las
diferencias entre las ITR de los clados de África
occidental y central sugieren la evolución del
virus aumentando: la virulencia, transmisibilidad
y evasión inmunitaria. Por lo que se sugiere que
estos cambios aumentarían los casos de viruela
símica en un corto o largo plazo (18).
Epidemiología
Desde el primer caso reportado en 1970, esta
patología se ha esparcido a países próximos de
la región, especialmente en el Centro–Oeste
de África (13). En el 2003, se reportaron a los
primeros pacientes contagiados de viruela símica
fuera del continente africano, identicándose
72 casos sospechosos o conrmados en Estados
Unidos. Estos pacientes se infectaron por estar en
contactos con animales infectados previamente
con pequeños mamíferos importados de países
africanos (20).
En mayo de 2022, se conrma por la OMS el
primer caso en Reino Unido. Era una persona que
viajó previamente a Nigeria. Varios días después,
dos casos más fueron identicados. Estas no
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presentaron viajes previamente, ni estuvieron en
contacto con el caso que se reportó días previos
(21). Los hombres jóvenes han sido el grupo etario
más reportado con casos de viruela símica; estos
fueron identicados como hombres que tienen
sexo con hombres (HSH), sin previo viaje a países
endémicos (22). En la actualidad, la cepa de África
Occidental ha sido aislada recientemente en este
brote internacional (15). En el 2022, el CDC ha
reportado 78.379 casos, mientras que en América
Latina son alrededor de 40.000 casos (3,6).
Transmisión
Animales infectados pueden transmitir la
enfermedad a un humano mediante: mordeduras,
arañazos y la mal cocción de la carne de estos
(15). No obstante, el reservorio denitivo del
virus no ha sido claramente identicado, ya que ha
sido aislado de varios animales como: mamíferos
pequeños y primates no humanos (23). Por otra
parte, el contacto piel con piel o con fómites como:
sábanas, ropa y el intercambio de secreciones
respiratorias; pueden ser factores de riesgo para la
transmisión entre humanos (24).
A pesar de ser una transmisión de carácter zoonótica,
no se ha logrado distinguir apropiadamente el
reservorio natural del agente patógeno. Entre los
más estudiados son: monos, ardillas de árbol,
roedores, marsupiales de Gambia, etcétera (25) .
La transmisión se podría dar por el contacto con
las lesiones de estos animales (26). Además, la
transmisión entre personas se debe al contacto
directo con: fómites contaminados, lesiones
dérmicas, gotículas o aerosoles de pacientes
infectados. Por otra parte, los pacientes que tienen
más riesgo de contagio son aquellos que tienen
contacto doméstico y comparten habitaciones
con personas infectadas (26). Además, la OMS
considera a las relaciones sexuales como un factor
de riesgo muy importante en ciertas poblaciones,
especialmente entre HSH, particularmente sin
protección y con múltiples parejas (26).
• Presentación clínica
Tabla #1: Presentación clínica de la viruela símica.
Obtenido de: Clinical Recognition | Monkeypox
| Poxvirus | CDC [Internet]. 2022 [cited 2022 Dec
1]. Available from: https://www.cdc.gov/poxvirus/
monkeypox/clinicians/clinical-recognition.html.
Los pacientes son infecciosos desde el momento
que presentan síntomas. En raras ocasiones,
los pacientes presentar complicaciones como:
encefalitis, sobreinfección bacteriana, neumonitis,
queratitis y conjuntivitis. Esto se puede asociar a
la salud inicial del individuo (15,27).
Diagnóstico
El diagnóstico de la viruela símica basado
solamente en la clínica es insuciente, debido a
los signos y síntomas de otros poxviridae, muy
similares a la de la viruela símica. Por esta razón, se
debe utilizar técnicas moleculares de diagnóstico
rápido para un control epidemiológico apropiado.
El método de elección es la PCR en tiempo real;
sin embargo, en ciertos países puede encontrarse
limitaciones principalmente en el costo de los
equipos (28).
Por otra parte, no se ha limitado el uso de pruebas
moleculares, ni el número de genes diana a utilizar.
Sin embargo, se debe considerar que toda prueba
molecular debe detectar al menos un gen diana
para identicar la presencia del virus (29).
Técnicas moleculares
Las pruebas moleculares para la detección del virus
incluyen: prueba de PCR en tiempo real (qPCR),
amplicación de polimerasa de recombinasa
(RPA), geneXpert y tecnología de amplicación
isotérmica mediada por bucle (LAMP) (30).
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unión al ADN monocatenario estabiliza la cadena
desnaturalizada y permite que los cebadores se
hibridan en la región diana (33).
La duración de la prueba puede ser entre 10 – 30
minutos y requiere una temperatura entre 37 – 42
Cº (33,37,38).
En comparación con las pruebas PCR, es más fácil
de usar y no requiere componentes tan costosos,
siendo útil en entornos de bajos recursos (35).
La principal limitación del RPA es que esta
prueba se utiliza principalmente en investigación
cientíca, por lo que su uso es limitado. Además,
los kits de RPA son costosos y difíciles de
conseguir (39).
GeneXpert
GeneXpert es una prueba semicuantitativa que
amplica y purica los ácidos nucleicos del virus.
Este utiliza un cartucho para evitar contaminar
la muestra (40). Esta tecnología se la emplea
principalmente en el diagnóstico de Mycobacterium
Tuberculosis con resistencia a la rifampicina,
virus del ébola y Stalococo Aureus resistente a la
meticilina (40,41). Según Li D et al. (40), el ensayo
con GeneXpert mostró una alta sensibilidad (100
%) y especicidad (100 %) en muestras de casos
sospechosos de pacientes con la viruela símica,
siendo muy preciso independientemente del tipo
de muestra recolectada (vesícula o costra). Una de
las ventajas del uso de GeneXpert es la mínima
manipulación de la muestra antes de cargar en el
cartucho y la automatización del equipo. Por otro
lado, se menciona que la prueba presenta ciertos
factores negativo como el alto costo de la máquina
GeneXpert de aproximadamente 60.000 USD.
Método de amplicación isotérmica mediada
por bucle (LAMP)
El método de amplicación isotérmica mediada
por bucle (LAMP) se caracteriza por realizar una
amplicación de manera más rápida y económica
en comparación a otras técnicas (42). Requiere
una temperatura constante entre 60 – 65 Cº y la
técnica requiere la utilización de 4 – 6 cebadores
que permitan la formación de horquillas en las
primeras fases de síntesis del ADN (33,43,44).
Siendo indispensable un correcto diseño de los
cebadores. Estos cebadores reconocen de 6 – 8
regiones distintas del gen diana; por lo que, se
considera al LAMP como una prueba altamente
PCR en tiempo real
De acuerdo a las recomendaciones de la OMS,
la PCR es la prueba más efectiva, por lo que, es
considerada el gold standard para la detección
de bases nucleicas (31,32). La qPCR, también
conocido como PCR cuantitativa, detecta la
presencia del patógeno, principalmente virus, sin
la necesidad de electroforesis y en tiempo real.
La utilización de: sondas, cebadores o moléculas
uorogénicas facilita la detección de los
amplicones. Durante la amplicación, se logra la
detección de la uorescencia, lo que cuantica los
amplicones en el PCR en tiempo real. El registro
de la transmisión emitida por la uorescencia se
da en la amplicación del gen, mediante un equipo
de sensor óptico y los resultados se evidencia
con la presencia de una curva que tiene 4 fases
distintas y reejan la eciencia de la amplicación
y el umbral de ciclo de la prueba. Se utiliza el
umbral de ciclo de la prueba para elaborar una
curva estándar con valores obtenidos de distintas
cantidades de esa molécula, esto para determinar el
número de copias de gen diana. En pocas palabras,
se compara la curva estándar con el umbral de
ciclo de permitiendo analizar el número de copias
del gen diana (33).
La principal limitación del PCR en tiempo real
es que requiere un laboratorio acondicionado
y un soporte estructural óptimo para trabajar
con esta tecnología, lo que aumenta el tiempo
de análisis y el costo. Además, se necesita un
manejo, pretratamiento y transporte altamente
especializado (34).
Técnica de amplicación mediada por
recombinasa (RPA)
La técnica de amplicación mediada por
recombinasa (RPA) es una prueba rápida, sencilla
y especíca para la amplicación de bases
nucleicos que requiere una temperatura constante
(35). A diferencia del PCR, esta no requiere
desnaturalizar la temperatura con calor debido a
que la actividad enzimática hibrida los cebadores
en la región objetivo (36). Para la amplicación
del gen diana, la RPA utiliza, principalmente,
tres proteínas y enzimas como: recombinasa,
polimerasa de desplazamiento de cadena y
proteínas de unión al ADN monocatenario. La
recombinasa se une a los cebadores para formar
el complejo cebador – recombinasa, facilitando
la desnaturalización. Además, la proteína de
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precisa y ecaz (33).
A diferencia de otras técnicas moleculares, el
LAMP amplica el ADN no desnaturalizado. Esto
se da con la ayuda de enzimas especícas como:
Bsm ADN polimerasa y Bst ADN polimerasa y
conservan su actividad enzimática a 63 Cº y 66 Cº,
respectivamente. Estas enzimas catalizan 5’–3’,
así como la polimerización de ADN 3’ – 5’, ya que
posee actividad de desplazamiento de cadena (33).
No obstante, LAMP tiene ciertas limitaciones
como la contaminación cruzada, la cual puede estar
presente en aerosoles. Los investigadores deben
ser conscientes de estas posibilidades y mantener
correctas ventilaciones y análisis de muestras por
separado (45).
Metodología
El presente estudio es una revisión bibliográca de
tipo narrativa.
Identicación: Se realizó una búsqueda basándose
en los Descriptores de Ciencias de la Salud (DeCS)
y MeSH utilizando términos como: “monkeypox”,
“monkeypox virus”, “Clinical laboratory
techniques”, “Molecular Diagnostic Techniques”.
Se establecieron las siguientes estrategias de
búsqueda “monkeypox AND Clinical laboratory
techniques”, “monkeypox virus AND Clinical
laboratory techniques”, “monkeypox virus AND
Clinical laboratory techniques AND Molecular
Diagnostic Techniques”.
Tamización: Se aplicaron criterios de inclusión
de los términos en búsqueda, resumen, palabras
claves o título; publicaciones en español e inglés;
artículos originales y tuvo como objetivo técnicas
de detección molecular en pacientes con viruela
símica. Estudios encontrados se analizaron para
descartar títulos duplicados. Algunas sintaxis para la
búsqueda fueron: Pubmed “(("Monkeypox"[Mesh])
AND ("Clinical Laboratory Techniques"[Mesh],
Science direct “((monkeypox virus AND clinical
laboratory techniques AND molecular laboratory
techniques))”.
Elección: Se aplicaron los criterios de exclusión
como: tesis, carta al editor, ensayos clínicos,
pacientes pediátricos, embarazadas; además,
estudios no disponibles en la base de datos
consultadas. Inclusión: Se incluyeron estudios
que cumplieron con los requisitos, analizando las
variables de forma cualitativa: año, autor, título,
nombre de la revisa, diseño de estudio, resultados,
conclusiones.
Limitaciones: Las limitaciones del trabajo se
debieron a: acceso restringido, idioma, estudios
recientes no nalizados.
Resultados
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Tabla #2: Resultados de los genes diana y límite de detección con las distintas pruebas moleculares.
Fuente: Elaboración propia.
Discusión
Los estudios realizados por la amplicación mediada
por recombinasa (RPA) fueron los artículos con los
límites de detección más bajos que el resto de las
técnicas y con los mismos genes diana estudiados:
G2L, G2R y proteína de unión al factor de necrosis
tumoral. Esto se suma a la rápida detección que varió
entre 7 – 30 minutos (37,38). Los estudios hechos con
PCR en tiempo real y LAMP utilizaron algunos genes
diana que dirieron entre sí y con límites de detección
ligeramente superiores. Sin embargo, destaca Yu C
et al. (44) que con un límite de detección 2 x 10^0
copias/reacción y el gen diana N4R identicó la
presencia del virus en 30 minutos y Panning M et al.
(51) que reportó el gen hemaglutida con un límite
de 25 copias/reacción, siendo altamente ecaz.
Estos estudios para detectar al virus de la viruela del
mono u otros poxviridae, presentan distintos genes
diana y límites de detección. Como se muestra
en la tabla #2, en las pruebas de PCR en tiempo
real, Mills M et al. (46) con un límite de detección
de 65,6 copias/ml para los genes F3L y G2R,
presentaron una alta sensibilidad y especicidad.
Sin embargo, el gen G2R presentó una reacción de
ciclos menor al del gen F3L, debido a la presencia
de dos copias en la región ITR. Además, Kulesh D
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et al. (50) con un límite de detección de 11 – 55 fg y
Maksyutov R et al. (48) con un límite de detección
no reportado, detectaron al gen F3L. Sugieren una
alta especicidad y sensibilidad lo que eliminaría
falsos positivos y negativos; incluso, detectando al
virus en tejido de roedores.
En las pruebas por amplicación mediada por
recombinasa (RPA), Dede S et al. (38) con un
límite de detección de 16 moléculas de ADN/
ul, siendo más rápido y ecaz que el estudio
propuesto por Mao L et al. (37) con un límite de
detección 10^0 copias/reacción, detectaron a los
genes: G2L, G2R y proteína de unión al factor de
necrosis tumoral. Dede S et al. (38) detectó al virus
en 7 minutos, siendo más rápido que la prueba de
PCR en tiempo real con una especicidad (100) %
y sensibilidad (95 %) altas; mientras que Mao L et
al. (37) tardó entre 20 – 30 minutos para conseguir
el mismo resultado. No obstante, la coincidencia
de la técnica de RPA-Cas12a con la de qPCR fue
tan solo de un 83.3 %. Por otro lado, la prueba
de GeneXpert propuesta por Li D et al. (40) que
investigó el gen G2R con un límite de detección
de 2.56 fg demostró abilidad en el estudio por un
alto: sensibilidad (98.8 %), especicidad (100 %),
valor predictivo positivo (VPP) y valor predictivo
negativo (VPN), independientemente de la toma
de la muestra (costra o vesícula) y de la etapa de
erupción. No obstante, las dicultades para la toma
de muestras y los altos costos de la prueba, sugieren
una considerable limitación para el estudio.
En la prueba de amplicación isotérmica mediada
por bucle (LAMP), los autores no coincidieron con
el estudio de un mismo gen diana. Ergo, Yu C et
al. (44) informó que el gen N4R con un límite de
detección relativamente able de 2 x 10^0 copias/
reacción, generó resultados precisos en 30 minutos
con una tasa de coincidencia del 100 % con la
prueba de qPCR. Además, este autor armó de las
limitaciones que conlleva las máquinas de PCR,
como: dicultades en zonas con recursos limitados
y necesidad de personal muy capacitado. Feng
J et al. (43) detectaron a los genes F3L y A27L
con un límite de 10^2 copias/reacción. Armó
que la utilización de cebadores indicó mayor
sensibilidad y especicidad. Adicionalmente,
destacó la importancia de innovar con más pruebas
moleculares que puedan sustituir en ciertas
situaciones a la prueba de PCR. Por último, Lizuka
I et al. (52) con un límite de 10^2.4 copias/reacción,
identicó al gen D14L; sin embargo, a pesar de las
ventajas que arma el autor de la técnica LAMP
sobre la qPCR, la sensibilidad fue entre 70 – 80 %.
Panning M et al. (51) en su estudio identicó al
gen hemaglutida con un límite de detección de 25
copias/reacción, el cual se presenta especícamente
en la familia de los orthopoxvirida. Este permitiría
la detección de estos virus, incluyendo al de la
viruela símica, además de reducción de costos y
reactivos, facilitando la exclusión de diagnósticos
diferenciales. Shchelkunov S et al. (49) reportó al
gen diana B7R para la identicación de: viruela
símica, vaccinia, viruela bovina y el virus de la
variola, con un límite de 50 copias/reacción.
El estudio demostró que el uso de cebadores
adecuados a este gen facilitó una especicidad del
100 % en la detección de estos virus. Por último,
Luciani et al. (47) arma haber realizado el primer
ensayo que detecta a cualquier poxviridae gracias
al gen D6R, el cual es un gen central que se
encuentra en toda esta familia de virus. Con un
límite de <1000 copias/reacción, este gen tiene
una sensibilidad (100 %) y especicidad (99.8
%) facilitando el diagnóstico de estas infecciones,
incluyendo nuevas cepas o virus emergentes.
Conclusiones
Se concluyó que las principales técnicas presentan
diversos métodos de amplicación genómica para
detectar al virus de la viruela del mono, estas
se diferencian según: la temperatura utilizada,
la computarización de la prueba, la cantidad de
cebadores empleados e incluso las limitaciones
de cada una; ergo, todas estas presentan una alta
sensibilidad y especicidad en la identicación
de los genes. Además, los estudios realizados en
RPA que detectaron a los genes: proteína de unión
al factor de necrosis tumoral, G2L y G2R, con
los límites de detección más bajos, presentaron
alta conabilidad y rapidez en la identicación
del virus. Por otra parte, los estudios recopilados
sugieren que, a pesar del gen diana reportado, el
límite de detección es indispensable para asegurar
una correcta abilidad y reproducibilidad de la
prueba, lo que puede ser importante para mejorar
el tiempo del diagnóstico y asegurar un rápido
cerco epidemiológico.
Revisión por pares
El manuscrito fue revisado por pares ciegos y fue
aprobado oportunamente por el Equipo Editorial
de la revista INSPILIP.
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Disponibilidad de datos y materiales
Los datos que sustentan este manuscrito
están disponibles bajo requisición al autor
correspondiente.
Contribución de los autores
Las distintas fases de la investigación fueron
realizadas por los autores, que contribuyeron de
igual forma en todo el proceso.
Fuente de nanciamiento
Se trabajó con recursos propios de los autores.
Conicto de intereses
Los autores declaran que no tienen conicto de
intereses.
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